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今天，你核酸了嗎？
對(duì)于核酸提取的知識(shí)你又了解多少？今天小編就給大家分享一些在核酸提取的知識(shí)。
一、什么是核酸
核酸是儲(chǔ)存、復(fù)制和傳遞遺傳信息的主要物質(zhì)，主要有DNA和RNA，而核酸提取是分子生物學(xué)應(yīng)用中最基本的步驟之一，是許多實(shí)驗(yàn)的先決條件。提取的核酸質(zhì)量將直接影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的結(jié)果。
二、核酸提取的基本步驟
1、裂解細(xì)胞，釋放核酸。使用裂解液破壞樣品細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而使樣品中的DNA游離在裂解體系中；
2、核酸的分離與純化。需要將與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)以及多糖、脂類等生物大分子和其他不需要的核酸分子去除；
3、核酸的濃縮、沉淀
4、純化核酸。純化則是使DNA與裂解體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)徹底分離的過程。
圖 核酸分離純化示意圖
三、核酸提取的基本步驟
酚氯仿抽法 | 異硫氰酸胍/苯酚法 | 離心柱法 | 磁珠法 | |
純度 | 較高 | 低 | 高 | 高 |
穩(wěn)定性 | 低 | 低 | 高 | 高 |
技術(shù)要求 | 高 | 高 | 低 | 低 |
操作時(shí)間 | 較長(zhǎng) | 長(zhǎng) | 短 | 短 |
表1 幾種核酸提取純化方法比較
1、酚氯仿抽法
此法是DNA提取的經(jīng)典方法，主要是使用兩種不同的有機(jī)溶劑交替抽提將蛋白去除。用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA的聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶，同時(shí)苯酚抑制了DNase的降解作用，蛋白質(zhì)分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA?的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA。離心后，DNA可取出。
2、異硫氰酸胍/苯酚法（Trizol法）
Trizol法是提取RNA的經(jīng)典方法，在勻質(zhì)化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時(shí)又能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后，裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后，RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可從中間相沉淀得到DNA，加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。
3、 離心柱法
通過特殊硅基質(zhì)吸附材料，能夠特定吸附DNA，而RNA和蛋白質(zhì)順利通過，然后利用高鹽低PH結(jié)合核酸，低鹽高PH值洗脫，來分離純化核酸。離心柱純化也是試劑盒提取中廣泛的使用方法。
4、 磁珠法提取
磁珠法不需要離心、無需加入多種試劑，操作簡(jiǎn)單，符合核酸自動(dòng)化提取要求。但是成本較高，科研端使用很難普及。
四、核酸檢測(cè)過程中用到哪些耗材
濾芯吸頭、離心管、PCR管、PCR8連排、PCR板、深孔板、封板膜、試劑槽、離心管架等
1. 濾芯吸頭
建諾為吸頭由進(jìn)口聚丙烯材質(zhì)制成，濾芯由超高分子量聚乙烯制成。10μl、10μl加長(zhǎng)、20μl、200μl、200μl加長(zhǎng)、300μl、1000μl、1000μl加長(zhǎng)等多種規(guī)格可供選擇。96支/盒，滅菌處理，無酶無熱原。
2. 微量離心管
建諾為離心管采用進(jìn)口聚丙烯材質(zhì)制成，0.6ml、1.5ml、2ml、5ml、10ml五種規(guī)格可選。
0.6/1.5/2/5ml可承受13000G離心力,10ml可承受6000G離心力，管體高透明，便于樣本觀察。袋裝，無酶無熱原，可提供滅菌和低吸附規(guī)格。
3.1、建諾為PCR八聯(lián)管（0.1ml,0.2ml）
無酶無熱原，顏色（白色/透明），平蓋，還有連蓋款。
3.2、建諾為PCR 96孔板（0.1ml,0.2ml）
無酶無熱原，顏色（白色/透明），裙邊（無裙邊/半裙邊），帶裙邊的PCR板適合在自動(dòng)化應(yīng)用中進(jìn)行處理，裙邊為自動(dòng)化的機(jī)械抓手提供了支撐面積。
3.3、建諾為384孔板（0.1ml）
無酶無熱原，顏色（白色/透明），板上有字母和數(shù)字標(biāo)記，方便標(biāo)示。
3.4、建諾為PCR封板膜
壓敏膜，對(duì)皮膚和手套無粘性，適用于熒光定量PCR檢測(cè)。
04. 試劑槽
建諾為試劑槽50ml規(guī)格。聚苯乙烯（PS）材質(zhì)，無菌獨(dú)立包裝。單渠 V 型底設(shè)計(jì)，適合在細(xì)胞培養(yǎng)和免疫分析等實(shí)驗(yàn)中與單通道和多通道移液器配合使用，三角引流設(shè)計(jì)，傾倒更安全。
電話：4009968872
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@建諾為生物
